霍乱弧菌能发酵多种糖类：对葡萄糖、麦芽糖、甘露糖、甘露醇、蔗糖、半乳糖、果糖、糊精和可溶性淀粉产酸不产气；迟缓发酵乳糖；不发酵阿拉伯糖、卫茅醇、水杨素、木胶糖、侧金盏花醇和肌醇。

对于来源于粪便标本的可疑霍乱弧菌菌落，在进行诊断血清凝集确认之前通常不需要进行生化特性的测定。进行菌落筛选时，直接用O1／O139群诊断血清或单克隆抗体进行凝集鉴定。在没有诊断血清或诊断单抗时，下列生化试验中前四项有辅助筛选作用，弧菌抑制剂O／129试验有助于O1群与O139群霍乱弧菌的鉴别。

1．氧化酶试验（Oxidase test）　弧菌属细菌大部分为阳性（其中仅麦氏弧菌与产气弧菌氧化酶阴性），作为弧菌菌落的简易辅助鉴定方法有一定意义，可区分于肠杆菌科细菌，后者氧化酶试验阴性。

2．粘丝试验（String test）　弧菌属细菌大部分为阳性（但某些副溶血弧菌为阴性），有助于区分非弧菌如气单胞菌属细菌，后者粘丝试验阴性。

3．克氏双糖铁（Kligler iron agar，KIA）和三糖铁琼脂（triple sugar iron agar，TSI）霍乱弧菌在KIA上的反应类似于不发酵乳糖的肠杆菌科细菌，KIA和TSI可用于排除假单胞菌属和部分肠杆菌科细菌。

4．赖氨酸铁琼脂（Lysine iron agar，LIA）　霍乱弧菌LIA的典型反应是碱性（紫色）斜面，碱性（紫色）底层，不产气，不产H ₂S，有助于筛选气单胞菌属和不产生赖氨酸脱羧酶的其他弧菌。

5．弧菌抑制剂O／129（2，4－diamino－6，7－diisopropyl pteridine phosphate，二氨基二异丙基喋啶）敏感试验O1群霍乱弧菌90%以上对10μg／ml O／129敏感，但大部分O139群霍乱弧菌具抗性。

6．V－P试验（Voges－Proskauer test）　检查弧菌分解葡萄糖是否产生乙酰甲基甲醇。大多数埃尔托型霍乱弧菌V－P试验阳性，而古典型霍乱弧菌除少数例外均为阴性，因此，用来鉴别霍乱弧菌古典型与埃尔托型尚有一定意义，O139群霍乱弧菌本试验多为阳性。